Cuantificación de la infección bacteriana en las células huésped mediante el ensayo de la unidad formadora de colonias

Para comenzar el ensayo de la unidad formadora de colonias, o UFC, para cuantificar las bacterias viables, tome una placa de pocillos múltiples que contenga macrófagos cultivados en medios de crecimiento. Infectar a los macrófagos con Listeria monocytogenes, una bacteria patógena capaz de crecimiento intracelular.

Durante la infección, los macrófagos engullen a las bacterias, internalizándolas dentro de un compartimento unido a la membrana: un fagosoma.

Las bacterias secretan una toxina formadora de poros y alteran la membrana fagosomal. De este modo, se permite que las bacterias entren en el citosol y se repliquen dentro de los macrófagos.

Trate brevemente los macrófagos infectados con gentamicina, un antibiótico que elimina selectivamente las bacterias no internalizadas mientras preserva las bacterias intracelulares.

Aspire el medio suprayacente que contiene antibióticos. A continuación, agregue agua destilada estéril sobre los macrófagos infectados, creando un ambiente hipotónico. Esto conduce a la ósmosis, donde las moléculas de agua ingresan a las células y causan la lisis de macrófagos, liberando los componentes intracelulares, incluidas las bacterias.

Extienda el lisado celu