Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:21 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de varios pocillos que contenga un cultivo de macrófagos. Infectar con Listeria monocytogenes que expresa proteínas fluorescentes, Lm.
Las proteínas en Lm se unen a receptores de macrófagos específicos, internalizando las bacterias dentro de un fagosoma. Además, Lm secreta toxinas formadoras de poros que alteran la membrana del fagosoma, liberando bacterias en el citosol, donde se replican y quedan rodeadas por filamentos de actina del huésped.
Las proteínas ActA inductoras de ensamblaje de actina en Lm inducen una polimerización continua de actina en el extremo posterior de la bacteria. La cola de cometa de actina generada impulsa a Lm a través del citosol y penetra en la membrana celular de los macrófagos, liberando Lm polimerizada envuelta en actina en el medio.
Después de la incubación, recolecte y fije los medios extracelulares, unidos a actina y que contienen Lm de un conjunto de pocillos. Arregle el Lm usando paraformaldehído. Agregue agua destilada, rompiendo los macrófagos y liberando el Lm intracelular. Recoger el Lm intracelular y fijar la muestra con paraformaldehído.
En otros pocillos, reemplace los medios con medios que contengan gentamicina impermeable
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