JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
0 vistas • 3:37 min • July 8th, 2025
Para infectar a las moscas, comience con una aguja de vidrio de diámetro estrecho llena de aceite mineral.
Asegure la aguja en el émbolo del nanoinyector con una junta tórica y un espaciador para una inyección precisa y controlada, asegurando un daño mínimo a las moscas.
Libere el aceite mineral, dejando una pequeña cantidad en la aguja como barrera entre la solución bacteriana y el inyector. Cargue la aguja con la suspensión bacteriana.
Coloque una Drosophila melanogaster anestesiada con el lado ventrolateral hacia arriba.
Inyecte la aguja en la parte anterior del abdomen de la mosca, perforando la cutícula y la capa epitelial. Administre la suspensión bacteriana en el hemocele, una cavidad corporal que contiene hemolinfa, un líquido circulatorio rico en nutrientes.
Dentro del hemocele, las células inmunitarias llamadas hemocitos circulan junto con el cuerpo graso, un tejido especializado equipado con receptores de reconocimiento de patrones.
Deje que las moscas inyectadas se recuperen en un vial que contenga medio. Las bacterias inyectadas utilizan los nutrientes de la hemolinfa y se multiplican, aumentando la carga bacteriana y estableciendo una infección sistémica.
Los receptores de las células grasas del cuerpo interactúan con los antígenos bacterianos, desencadenando una respuesta inmune para producir péptidos antimicrobianos, eliminando finalmente algunas bacterias.
Los hemocitos circulantes realizan actividad fagocítica, engullendo y degradando algunas bacterias. Sin embargo, algunas bacterias evaden la respuesta inmune del huésped y sobreviven dentro de las moscas, estableciendo una infección bacteriana.
Prepare una aguja de vidrio tirando de un capilar de vidrio de borosilicato y use fórceps para romper la punta de la aguja para crear una abertura de 50 micrómetros de diámetro. A continuación, coloque la junta tórica de sellado y el espaciador blanco, con el hoyuelo grande hacia afuera, en el émbolo metálico del inyector. Llene la aguja de vidrio con aceite mineral con una jeringa con una aguja de calibre 30.
Luego, coloque la aguja de vidrio llena a través de la pinza y coloque la junta tórica más grande alrededor de su base, a 1 milímetro del extremo romo de la aguja. Deslice la aguja sobre el émbolo de metal y atornille suavemente la pinza hasta que quede segura.
Disipe el aceite mineral del inyector dejando un pequeño volumen de aceite en la aguja para que actúe como barrera entre el inyector y la suspensión bacteriana. Asegúrese de que no haya burbujas de aire dentro del aceite mineral, suspensión bacteriana o entre los dos líquidos. Luego, ajuste el inyector al volumen deseado para la inyección. Inserte con cuidado la punta de la aguja capilar en un tubo de PBS estéril y presione el botón de llenado en el inyector para llenar la aguja del inyector.
Para generar controles de heridas, inyecte moscas anestesiadas con PBS estéril en la parte anterior del abdomen en la superficie ventrolateral. Coloque las moscas inyectadas en viales nuevos con medios nuevos y coloque los viales de lado para evitar que las moscas se peguen a la comida antes de que se recuperen de la anestesia. A continuación, expulse el medio estéril restante del inyector y vuelva a llenar la misma aguja con la suspensión bacteriana. Repita el procedimiento e inyecte las moscas con la suspensión bacteriana.