Medición de la carga bacteriana de E. coli en Drosophila melanogaster después de una infección por E. coli

Comience con moscas adultas Drosophila melanogaster inyectadas con E. coli. En los momentos deseados después de la inyección, transfiera las moscas anestesiadas a tubos de microcentrífuga separados en hielo, reduciendo su actividad metabólica.

Agregue tampón y homogeneice las moscas, descomponiendo el tejido, liberando E. coli y microbiota intestinal endógena.

Transfiera cada homogeneizado de mosca que contenga E. coli a pocillos de placas de pocillos múltiples. Llene los pocillos restantes con tampón. Realice una dilución en serie del homogeneizado que contiene E. coli.

Deposite la suspensión homogeneizada diluida de cada pocillo y los puntos discretos en una placa de agar nutritivo, comenzando por la dilución más baja. Deje que las manchas se absorban en el agar. Incube la placa durante la noche para permitir la multiplicación de E. coli, formando colonias visibles. La duración de la incubación es fundamental para prevenir la formación de colonias de microbiota intestinal endógena de la mosca.

Cuente las colonias de E. coli para cada mosca de las diluciones con colonias contables que no se superponen. Calcule la unidad formadora de colonias, la carga bacteriana viable, en el homo