Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:44 min. • July 8th, 2025
Para detectar la activación del inflamasoma del receptor P3 similar a NOD, o NLRP3, tome una placa de pocillos múltiples que contenga macrófagos activados que expresan proteínas NLRP3.
Tratar las células con medios que contengan ionóforos y glicina. Los ionóforos inducen la salida de iones de potasio, activando y oligomerizando las proteínas NLRP3. El NLRP3 oligomerizado recluta proteínas adaptadoras, lo que facilita la unión de la pro-caspasa-1, formando el complejo inflamatorio NLRP3.
En el inflamasoma, la proximidad desencadena la autoescisión de pro-caspasa-1, liberando caspasas activas, iniciando piroptosis y condensación nuclear. Además, la glicina estabiliza la estructura celular, evitando la lisis celular.
Trate los macrófagos con sondas reporteras fluorescentes que contengan un grupo de unión de caspasa-1 y un fluoróforo unido a través de una secuencia de aminoácidos. La caspasa-1 activada reconoce la secuencia de aminoácidos de la sonda y se une a su grupo de unión a caspasa, lo que permite su visualización.
Fije las células y cúbralas con tinte fluorescente para teñir los núcleos. Imagen bajo un microscopio de fluorescencia.
Cuente macrófagos con núcleos condensados azul
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