Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:06 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa que contenga un cultivo de macrófagos primarios.
Introducir lipopolisacárido bacteriano, LPS, que se une a los receptores tipo toll en los macrófagos, desencadenando la regulación positiva de la familia de proteínas NLR que contiene el dominio de pirina 3 o NLRP3.
Agregue un ionóforo que medie la salida de iones de potasio. La disminución del potasio citosólico activa NLRP3. El NLRP3 activado oligomeriza e induce el reclutamiento de una proteína adaptadora, que a su vez recluta pro-caspasa-1, formando un inflamasoma.
La autoproteólisis convierte la pro-caspasa-1 en caspasa-1 activa, que media la muerte celular inflamatoria o piroptosis. El daño del ADN durante la piroptosis conduce a la condensación nuclear.
Fije las células y trátelas con un detergente para permeabilizarlas.
Agregue un anticuerpo primario que se une a la proteína adaptadora asociada al inflamasoma y un anticuerpo secundario marcado con fluorescencia que se une al anticuerpo primario, marcando el inflamasoma.
Introduzca una tinción de ácido nucleico fluorescente para etiquetar el núcleo. Bajo un microscopio de fluorescencia, las células muestran núcleos condensados, lo que indica piroptosis,
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