Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:02 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de ensayo que contenga macrófagos preparados con lipopolisacáridos.
El cebado aumenta la expresión de precursores de citoquinas proinflamatorias inactivas y proteínas NLRP3.
Agregue nigericina, un ionóforo de potasio, que promueve la salida de iones. Esto altera los niveles de potasio intracelular, lo que desencadena las proteínas NLRP3 para formar un gran complejo.
El NLRP3 oligomerizado recluta las proteínas adaptadoras, ASC, provocando su polimerización. Los filamentos de ASC reclutan pro-caspasa-1, formando NLRP3-inflamasoma, un complejo multiproteico.
La pro-caspasa-1 se somete a una autoactivación inducida por proximidad, generando caspasa-1. La caspasa-1 escinde la citocina proinflamatoria y la proteína gasdermina-D, creando un poro de la membrana plasmática.
Esto da como resultado la secreción de citoquinas y la muerte celular programada inflamatoria, piroptosis, liberando contenidos intracelulares, incluida la lactato deshidrogenasa o LDH. Recoge el sobrenadante que contiene LDH.
Agregue la mezcla de sustrato: lactato, violeta de yodonitrotetrazolio o tinte INT, NAD+ y diaforasa. La LDH oxida el lactato a piruvato mientras reduce el NAD+. La diaforasa catali
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