Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:57 min. • July 8th, 2025
Tome un tubo de vidrio que contenga homogeneizado de neutrófilos con componentes intracelulares liberados.
Agregue metanol, un solvente polar, que interrumpe las interacciones lípido-lípido y lípido-proteína. La polaridad inherente del metanol distribuye uniformemente los lípidos polares, solubilizándolos. A continuación, agregue cloroformo, un solvente orgánico no polar, que interactúa con los lípidos no polares, lo que hace que se dispersen y solubilicen.
Centrífuga para separar el gránulo que contiene proteínas del sobrenadante que contiene lípidos, polisacáridos y restos celulares. Transfiera el sobrenadante a un tubo de vidrio nuevo. Agregue cloroformo y agua destilada. Centrifugar la muestra.
La adición de agua forma espontáneamente un sistema bifásico, dividiendo las biomoléculas dentro de las capas inferiores de cloroformo y las capas superiores de agua-metanol.
La capa de cloroformo comprende lípidos no polares disueltos, mientras que la capa superior contiene contaminantes no lipídicos y más lípidos polares. Retire la capa superior de agua-metanol sin alterar la capa que contiene lípidos.
Use un concentrador de vacío para eliminar el solvente de los lípidos. Almacenar a t
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