JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
0 vistas • 2:49 min • July 8th, 2025
Tome un ratón anestesiado con orejas depiladas y aplique el antígeno de prueba, un hapteno mezclado en una solución vehicular adecuada, sobre la piel expuesta. La solución del vehículo facilita la penetración del hapteno a través de la capa más externa de la epidermis para llegar a la dermis subyacente.
El hapteno se une a las proteínas de la piel, formando un inmunógeno reconocido por las células presentadoras de antígenos o APC. Al engullir, las APC procesan y muestran el inmunógeno en su superficie.
Las APC migran a los ganglios linfáticos, presentando el inmunógeno a las células T vírgenes y activándolas. Las células activadas se diferencian en células T de memoria preparadas, un subconjunto de las cuales migran a la piel.
Tras la reexposición al hapteno, las APC presentan el inmunógeno a las células T preparadas, induciendo la liberación de citoquinas proinflamatorias.
Las citocinas desencadenan queratinocitos y mastocitos para liberar quimiocinas, que se unen a los neutrófilos circulantes, facilitando su extravasación. Los neutrófilos extravasados llegan al sitio de la inflamación.
Las citocinas activan los neutrófilos para producir enzimas proteolíticas y especies reactivas de oxígeno, lo que causa daño tisular y amplifica la inflamación.
Para comenzar, anestesiar al ratón con una inyección intraperitoneal de un cóctel anestésico y confirmar la sedación adecuada con una prueba de pellizco del dedo del pie. A continuación, aplique crema depilatoria en la superficie dorsal de ambas orejas. Límpialo en un minuto y lava la piel con agua.
Mida el grosor de la oreja donde se realizaron las aplicaciones usando un micrómetro. Más tarde, devuelva al ratón a su propia jaula después de que se recupere de la anestesia y deje que el ratón descanse durante al menos tres días antes de realizar más pruebas.
Después de tres días, vuelva a anestesiar al ratón y vuelva a medir el grosor de la oreja para asegurarse de que no esté irritado. Luego, aplique 12,5 microlitros de oxazolona al 1,25% en cada lado del oído derecho y aplique 12,5 microlitros de la solución de acetona-aceite de oliva en cada lado del oído izquierdo.
Como siempre, observe cómo el ratón se recupera de la anestesia. 24 horas después, vuelva a medir el grosor de la oreja bajo anestesia, para asegurarse de que se haya producido la inflamación de la piel inducida por la oxazolona.