Análisis de sinapsis inmunitarias entre células T humanas y células Raji cargadas con SEB mediante citometría de flujo por imágenes

Tome tubos de citometría de flujo que contienen células Raji descargadas y enterotoxina B de Staphylococcus aureus o células Raji cargadas con SEB.

Estas células Raji cargadas con SEB funcionan como células B presentadoras de antígeno sustituto que contienen el superantígeno SEB complejado con moléculas MHC de clase II.

Incubar con pan-leucocitos.

Los receptores de células T, TCR en las células T se unen a los SEB en las células Raji, que, junto con las señales coestimuladoras, establecen una unión estable célula-célula, una sinapsis inmune, que conduce a la activación de las células T.

Esto desencadena vías de señalización intracelular, causando el reordenamiento del citoesqueleto de actina, con la agrupación de moléculas de señalización y receptores de superficie dentro de la sinapsis.

Después de la incubación, fije las células para preservar sus estructuras celulares. Permeabiliza las células para acceder a dianas intracelulares.

Agregue anticuerpos anti-CD3 marcados con fluoróforo, faloidina y DAPI, que se unen a CD3 en el complejo TCR, filamentos de actina y ADN, respectivamente.

Usando un citómetro de flujo de imágenes, visualice las señales fluorescentes de CD3 y actina para