Un ensayo para estudiar el papel de la vitronectina en la adherencia bacteriana a las células epiteliales del huésped
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:53 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga monocapas de células epiteliales adheridas. Reemplace los medios con medios sin suero, evitando la interferencia de proteínas séricas. Después de la incubación, retire el medio. Lave las células con tampón. Agregue medios fríos sin suero que contengan vitronectina. Incubar a temperaturas más bajas.
El dominio RGD N-terminal de la vitronectina se une a los receptores de integrina de la superficie celular epitelial. Las temperaturas más bajas inhiben la internalización celular del complejo vitronectina-integrina.
Después de la saturación del receptor de integrina, retire el medio. Lavar con tampón para eliminar el exceso de vitronectina, lo que podría afectar la unión bacteriana de la integrina dependiente de vitronectina.
Agregue la suspensión de Haemophilus influenzae tipo f o Hif, un patógeno bacteriano gramnegativo. Incubar.
La proteína H en la superficie de Hif se une al extremo C de la vitronectina, lo que facilita la adherencia de Hif a la célula epitelial y la posterior internalización.
Retire el medio y lave con tampón para eliminar el Hif no unido. Use una enzima de desprendimiento celular para recolectar las células. Agregu
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