Determinación del papel de la vitronectina en la resistencia bacteriana a la actividad bactericida del suero humano

Para investigar el impacto de la vitronectina, una glicoproteína sérica humana, en las bacterias, comience con tubos que contengan suspensión de Haemophilus influenzae.

Trate un tubo con suero humano normal que contenga vitronectina y el otro con suero empobrecido en vitronectina. Ambas variantes séricas contienen anticuerpos y varias proteínas del complemento, esenciales para la actividad bactericida.

Durante la incubación, los anticuerpos interactúan con las proteínas de la superficie bacteriana, activando las proteínas del complemento para formar la convertasa C5, que escinde C5. C5b se asocia con C6, seguido de C7, formando el complejo C5b6-7. Este complejo se une a la membrana celular bacteriana y recluta C8, formando C5b67-8.

Este proceso facilita la unión de los monómeros C9 y su polimerización, generando el complejo de ataque a la membrana, una estructura formadora de poros. Estos poros provocan la afluencia de iones y agua, lo que conduce a la lisis bacteriana.

Por el contrario, en el tubo con suero normal, la vitronectina se une a una proteína de la superficie bacteriana que interactúa con el complejo C5b6-7 y los monómeros C9. Estas interacciones evitan el reclutamiento de C8 y la polimerización de C9, inhibiendo la formación de complejos de ataque a la membrana y conduciendo a la supervivencia bacteriana.

Tome la suspensión bacteriana tanto de los tubos como del cultivo en placas de agar individuales.

Las colonias bacterianas más altas en el suero que contiene vitronectina confirman su papel en la resistencia bacteriana contra la actividad bactericida del suero humano.

Para realizar el análisis de la resistencia dependiente de vitronectina a la actividad bactericida del suero humano, primero, cultivar y granular las bacterias como se describe en el protocolo de texto. Después de la centrifugación, vuelva a suspender el gránulo bacteriano con 1 volumen de tampón veronal de gelatina de dextrosa. Ahora agregue 1,500 UFC de bacterias a 100 microlitros de DGVB ++ que contienen 5% de suero.

Incubar la muestra a 37 grados centígrados durante 15 minutos agitando a 300 RPM. Retire una alícuota de 10 microlitros de la mezcla de reacción a los 0 minutos y 15 minutos. Coloque la alícuota en agar chocolate e incube el plato a 37 grados centígrados durante la noche. Después de la incubación de las placas de agar de chocolate, cuente las colonias que aparecen en la placa y calcule el porcentaje de bacterias muertas como se describe en el protocolo de texto.