Inyección subcutánea de antígeno bacteriano para inducir inflamación sistémica en un modelo murino

0 vistas3:52 min • July 8th, 2025

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Para inducir la inflamación sistémica, una respuesta inflamatoria generalizada, comience colocando un ratón anestesiado con el lado dorsal hacia arriba. Tome una jeringa que contenga emulsión micobacteriana de depósitos de antígenos y adyuvantes de micobacterias, un depósito de aceite localizado de la mezcla de antígeno y adyuvante.

Perfore la epidermis y las capas de la piel de la dermis del ratón e inyecte la emulsión antígeno-adyuvante por vía subcutánea proximal al ganglio linfático inguinal. Después de la inyección, el depósito libera antígenos continuamente en el tejido circundante, lo que proporciona una exposición prolongada de los antígenos al sistema inmunológico.

Las

células presentadoras de antígenos, o APC, en el tejido, interactúan con los antígenos micobacterianos inyectados, los internalizan y los procesan en péptidos. Estos péptidos se presentan en la superficie de las APC utilizando complejos principales de histocompatibilidad, lo que desencadena la liberación de citocinas y quimiocinas proinflamatorias.

Este proceso genera inflamación localizada y desencadena la apertura de los vasos linfáticos, lo que permite la entrada de células inmunitarias, incluidas las APC portadoras de antígenos, en el sistema linfático y llegando al ganglio linfático inguinal.

En los ganglios linfáticos, los receptores de células T de las células T auxiliares interactúan con los antígenos en la superficie de las APC y se activan. Las células T activadas liberan citoquinas proinflamatorias, que viajan a través de los vasos linfáticos y se liberan en varios otros tejidos.

Las citoquinas proinflamatorias liberadas atraen a las células inmunitarias a estos tejidos, induciendo inflamación sistémica.

Para comenzar, suelte el cuerpo de la unidad convertidora del sonicador y limpie la sonda con un hisopo con alcohol al 70%. Luego, encienda el sonicador y ajuste la configuración de potencia a 4, girando la perilla de control de potencia.

A continuación, para generar una suspensión fina de Mycobacterium tuberculosis H37Ra en PBS, sumerja la punta de la sonda en el polvo micobacteriano que contiene PBS. Sonica la mezcla en hielo durante 30 segundos, luego, haz una pausa de 30 segundos y repite durante un total de 5 minutos para dispersar completamente el polvo en una suspensión uniforme sin calentar el líquido. A continuación, añada 2,5 mililitros de adyuvante incompleto de Freund a la mezcla y repita el proceso de sonicación con hielo hasta que la emulsión forme una consistencia similar a la de una pasta de dientes.

Para la inyección subcutánea, cargue de 200 a 300 microlitros de la emulsión micobacteriana en una jeringa de 1 mililitro. Expulse el aire de la jeringa y continúe llenando la jeringa, invirtiendo y golpeando intermitentemente, hasta que se llene.

A continuación, coloque las inyecciones subcutáneas en la superficie dorsal de las caderas o en la superficie ventral de las piernas proximal a la región de los ganglios linfáticos inguinales de un ratón C57Black/6J anestesiado de 6 a 10 semanas de edad. Inserte con cuidado la aguja, teniendo cuidado de no penetrar en el músculo, e inyecte 50 microlitros de la emulsión en el espacio subcutáneo. No retire la aguja inmediatamente para permitir que la emulsión espesa se inyecte por completo.

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Última actualización: 22 agosto 2026