Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:06 min. • July 8th, 2025
Comience con un cultivo descongelado de Mycobacterium bovis BCG lux, una cepa bioluminiscente modificada genéticamente de Mycobacterium bovis atenuada que expresa la enzima luciferasa reportera.
Inocular la suspensión en un matraz de cultivo que contenga el medio de crecimiento antibiótico suplementado con higromicina. Incubar. BCG lux alberga el gen resistente a la higromicina, lo que facilita su supervivencia y crecimiento.
Después de la incubación, prepare diluciones de cultivo adecuadas utilizando un tampón en tubos de luminómetro. Transfiera al luminómetro, cargado con una solución de sustrato de aldehído alifático de cadena larga. Durante la carrera, el aldehído se inyecta en la suspensión micobacteriana que ingresa a las células.
La luciferasa bacteriana cataliza la oxidación del mononucleótido de flavina reducida endógena y el aldehído, lo que da como resultado la emisión de luz azul verdosa. La intensidad de bioluminiscencia medida indica la actividad metabólica de BCG lux y se correlaciona con la medida de bacterias viables o unidades formadoras de colonias, UFC.
A continuación, centrifugar el cultivo de micobacterias restante. Vuelva a suspender el gránulo de micobacteri
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