JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
0 vistas • 2:49 min • July 8th, 2025
Para cuantificar la colonización de Helicobacter pylori en un estómago de ratón infectado, comience con el tejido estomacal aplanado que contiene las regiones del cuerpo y el antro, suspendido en medios nutritivos para apoyar la viabilidad bacteriana.
Homogeneizar para descomponer el tejido gástrico con la capa de moco, liberando Helicobacter pylori del tejido al medio. Realice diluciones en serie del homogeneizado gástrico resultante utilizando medios.
Obtener agar sangre de caballo seca, HBA, placas, divididas en múltiples segmentos. Las placas de HBA se complementan con una mezcla de antibióticos. Transfiera cada dilución homogénea a segmentos separados de la placa y extiéndala uniformemente.
Después del secado, coloque las placas en posición invertida dentro de un frasco de cultivo anaeróbico humidificado con mezclas de gases especializadas. Incubar.
El ambiente microaerofílico proporcionado por el frasco de cultivo anaeróbico junto con los nutrientes HBA facilita que Helicobacter pylori crezca y forme colonias. Los antibióticos en HBA inhiben el crecimiento de especies bacterianas de la microbiota gástrica endógena.
Cuente las colonias de Helicobacter pylori en segmentos de placa HBA que caen dentro de un rango contable específico.
Calcule la carga de Helicobacter pylori en el tejido gástrico, indicando el grado de colonización bacteriana dentro del tejido.
Para contar el número de H. pylori viables en el estómago después de la infección, homogeneice las muestras de estómago almacenadas en BHI y realice diluciones seriadas duplicadas de los homogeneizados gástricos resultantes en caldo fresco estéril.
Divida el agar sangre de caballo presecado, o placas de HBA, suplementadas con antibióticos adicionales en tres o cuatro segmentos y, utilizando una adaptación de la técnica de Miles y Misra, agregue de 10 a 100 microlitros de cada dilución homogeneizada del estómago en un segmento de cada placa de agar. Extienda los homogeneizados con bucles de plástico estériles y deje que las placas se sequen. Luego, coloque las placas en posición invertida en frascos de gas anaeróbico que contengan una placa de Petri con agua y un paquete de gas, luego, incube los frascos a 37 grados centígrados durante cuatro a siete días.
Cuando se puedan observar colonias, enumere los segmentos que contienen entre 10 y 100 colonias aisladas.