Cuantificación de la infiltración de células inmunitarias en tejido de vejiga de ratón uropatógeno infectado con E. coli mediante citometría de flujo

Para cuantificar la infiltración de células inmunitarias en el tejido de la vejiga de ratón infectado con E. coli uropatógeno, coloque el tejido picado en un tampón de digestión que contenga colagenasa y desoxirribonucleasa.

Incube agitando regularmente para alterar el tejido.

La colagenasa digiere la matriz extracelular del tejido, liberando células. La desoxirribonucleasa degrada el ADN libre que interfiere.

Después de la incubación, agregue tampón con un agente quelante y suero bovino fetal para inactivar las enzimas digestivas.

Pasar la mezcla digerida por un colador para eliminar los restos de tejido y tejido conectivo, obteniendo una suspensión unicelular.

Centrifugar y resuspender las células en un tampón que contenga anticuerpos bloqueadores de Fc. Estos anticuerpos se unen a los receptores Fc de las células inmunitarias para evitar la unión de anticuerpos no específicos.

Agregue anticuerpos anti-CD45 marcados con fluoróforos, que se unen a la proteína CD45 transmembrana en las células inmunitarias.

Centrifugar y pasar las células resuspendidas a través de un filtro celular para eliminar los agregados celulares.

Usando un citómetro de flujo, mida las señales de fluorescenci