Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:49 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa de múltiples pocillos que contenga células mononucleares de sangre periférica humana, o PBMC derivadas de un virus de inmunodeficiencia humana o de un donante infectado por el VIH.
Las PBMC contienen varias células inmunitarias, incluidas las células T CD4 positivas infectadas por el VIH con ADN proviral integrado.
Siembre los pocillos con una mezcla de eritrocitos parasitados por Plasmodium falciparum, o PfRBC, que expresan antígenos derivados del parásito y glóbulos rojos no infectados.
Durante la incubación, los antígenos de los PfRBC interactúan con los receptores de las células inmunitarias, activándolas y liberando citocinas.
Estas citocinas desencadenan la señalización posterior en las células T CD4, iniciando la transcripción del ADN proviral del VIH y la síntesis de nuevos ARN virales.
Los ARN virales y las proteínas del VIH forman partículas de virus que brotan, infectando nuevas células T CD4 y propagando la infección por VIH.
La infección progresiva por VIH interrumpe la secreción de citoquinas, lo que afecta la respuesta inmunitaria contra los PfRBC y conduce a una infección persistente por malaria.
Con el tiempo, los glóbulos rojos infectados liberan parásitos que invaden nuevos glóbulos rojos, proliferando parásitos de la malaria y estableciendo el modelo de cultivo celular de coinfección entre la malaria y el VIH.
Para configurar los cultivos de coinfección, comience sembrando 1 x 106 de PBMC VIH positivo y VIH negativo recién aislado en 100 microlitros de RPMI-S+ por pocillo en una placa de 24 pocillos. Lleve el volumen total de cada pocillo a 500 microlitros con 400 microlitros de RPMI-S+.
Luego, por triplicado y en un volumen total de 500 microlitros por pocillo, agregue 3 x 106 glóbulos rojos no infectados o 3 x 106 glóbulos rojos parasitados a las células infectadas y no infectadas por el VIH. Coloque la placa de coinfección en una incubadora de cultivos celulares.
Luego, después del período de tiempo experimental apropiado, granular las células y recolectar 700 microlitros de sobrenadante de cultivo de cada pocillo. Centrifugar el sobrenadante para eliminar cualquier residuo. Luego, alícuotas de las muestras según corresponda; etiquete los tubos y congélelos a menos 20 grados centígrados o menos para su posterior análisis.