JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
0 vistas • 2:33 min • July 8th, 2025
Tome un cultivo de organoides intestinales humanos. Los organoides consisten en células epiteliales orientadas hacia la luz central, imitando la arquitectura in vivo.
Tome un microinyector que contenga esporozoítos en forma de media luna, la forma infecciosa, de Cryptosporidium parvum, un parásito.
Inyecte esporozoítos en la luz del organoide.
Las lectinas de parásitos se unen a carbohidratos específicos en las células epiteliales, facilitando su entrada en una vacuola parasitófora.
El parásito internalizado se transforma en un trofozoíto, la etapa de alimentación, que adquiere nutrientes y se somete a una reproducción asexual para formar meront tipo I, que contiene merozoítos, la forma invasora.
Los merozoítos liberados infectan las células epiteliales vecinas y desarrollan merontos tipo II que contienen merozoítos.
Los merozoítos ingresan a las células vecinas y se diferencian en microgamont o macrogamont, etapas reproductivas masculinas y femeninas.
El microgamont se divide para formar microgametos, que se liberan fuera de la vacuola.
Un microgameto fertiliza el macrogamont, produciendo un cigoto.
El cigoto sufre división, formando un ooquiste que contiene esporozoíto. Tras su liberación, los esporozoítos repiten el ciclo de infección.
Recolecte los organoides para evaluar el progreso de la infección.
Para microinyectar los parásitos en el lado apical de un organoide 3D, primero, use un extractor de micropipetas para preparar los capilares de inyección de vidrio. Use fórceps para cortar la punta del capilar a un diámetro de 9 a 12 micrómetros, para permitir un flujo fácil de esporozoítos u ooquistes si elige inyectar ooquistes directamente, y use puntas de microcarga para llenar cada capilar con una suspensión rápida de ooquistes o esporozoítos marcados con tinte verde.
Luego, cargue el primer capilar lleno de esporozoíto en un microinyector y use un microscopio invertido con un aumento de 5x y una presión constante para microinyectar de 100 a 200 nanolitros de la suspensión en cada organoide.