Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:37 min. • July 8th, 2025
Durante la infección, los macrófagos alveolares liberan trampas extracelulares de macrófagos o MET para eliminar patógenos.
Los MET consisten en fibras de cromatina complejadas con peptidil arginina deiminasas, PAD, metaloproteinasas de matriz e histonas citrulinadas.
Para visualizar los MET en macrófagos del líquido de lavado broncoalveolar, primero, centrifugue el líquido.
Coloque las celdas resuspendidas en cubreobjetos dentro de pocillos de placas de pocillos múltiples.
Los macrófagos se adhieren a los cubreobjetos, mientras que otras células permanecen suspendidas y se descartan.
Fije los macrófagos, preservando la estructura celular. Permeabilizarlos para acceder a los objetivos celulares.
Agregue proteínas bloqueadoras, evitando la unión de anticuerpos inespecíficos.
Complementar con un cóctel de anticuerpos primarios que se une a las histonas citrulinadas diana, las PAD y las metaloproteinasas de la matriz, respectivamente.
Agregue diferentes anticuerpos secundarios marcados con fluoróforos que se unan a los anticuerpos primarios unidos a proteínas MET diana.
Monte las celdas con un medio de montaje que contenga DAPI. DAPI, un tinte fluorescente, tiñe las fibras de cromatin
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