Instilación intrabronquial de Streptococcus pneumoniae en modelos de roedores inmunocompetentes

Obtenga un dispositivo de intubación estéril que consiste en una cánula de metal con tubo de polietileno conectado a una aguja de metal.

Coloque una jeringa que contenga Streptococcus pneumoniae en la aguja y llene el tubo.

A continuación, coloque una rata inmunocompetente anestesiada en posición supina.

Inserta el extremo libre de la cánula de metal en la boca de la rata. Hágalo avanzar hacia la tráquea hacia el bronquio izquierdo y bajar por el pulmón izquierdo hasta una profundidad adecuada.

Avance el tubo hasta el extremo de la cánula e instile la suspensión bacteriana en el lóbulo pulmonar izquierdo.

La cápsula bacteriana y las enzimas asociadas a la superficie evitan el atrapamiento bacteriano en el moco. Además, Streptococcus pneumoniae se adhiere a los receptores de superficie en las células epiteliales bronquiales, lo que facilita la endocitosis y la liberación a la superficie basolateral.

Las bacterias secretan toxinas que dañan las células epiteliales y las barreras, desencadenando una respuesta inmune.

Sin embargo, Streptococcus pneumoniae ha desarrollado estrategias para evadir la respuesta inmune del huésped y establecer una infección pulmonar.

Coloque una alfombra desechable limpia sobre la superficie de trabajo, cerca del baño de agua.

Para preparar la superficie de trabajo y el dispositivo de intubación, primero, esterilice la cánula de metal y el tubo de polietileno de acuerdo con el protocolo de texto, y luego, transfiéralo en su tubo de almacenamiento de vidrio a la superficie de trabajo. Luego, retire la tapa del tubo de almacenamiento y deslice el extremo del mango de la cánula hasta el extremo abierto del tubo. Con unas pinzas estériles, retire un trozo de tubo de polietileno del vaso de precipitados e insértelo por el interior de la cánula metálica estéril, asegurándose de que se mueva libremente. Coloque una marca de guía en un lugar predeterminado con un bolígrafo indeleble.

A continuación, coloque una aguja estéril desechable de calibre 25 en el extremo libre del tubo de polietileno deslizando la aguja varios milímetros dentro del tubo. Luego, use solución salina estéril para llenar una jeringa desechable nueva de 1 mililitro. Conecte la jeringa a la aguja colocada en el tubo de polietileno y enjuague todo el volumen de solución salina a través del tubo.

Deseche la jeringa usada en el recipiente para objetos punzantes. Luego, llene una nueva jeringa desechable estéril de 1 mililitro con el inóculo a base de agar del baño de agua. Vuelva a colocar la aguja y el tubo de calibre 25 y enjuague el agar a través del tubo presionando el émbolo hasta que el tubo esté completamente lleno de agar.

Después de anestesiar a la rata de acuerdo con el protocolo de texto, coloque al animal en posición supina sobre la alfombra desechable, con la cabeza hacia la derecha y la cola hacia la izquierda. A continuación, inserte el extremo libre de la cánula de metal en la boca del animal. Gire la cánula para que el extremo libre quede inclinado hacia arriba y avance suavemente hacia la tráquea, evitando cuidadosamente las estructuras laríngeas con un ligero movimiento de torsión.

Confirme la inserción en la tráquea en lugar del esófago deslizando suavemente la cánula ligeramente hacia adelante y hacia atrás varias veces, mientras usa el dedo índice izquierdo para palpar los anillos traqueales.

Para asegurar la intubación en la tráquea y no en el esófago, mueva la cánula ligeramente hacia adelante y hacia atrás y sienta las crestas. Si la cánula se desliza suavemente por la garganta y no se pueden sentir las crestas, retire el dispositivo y vuelva a intentarlo.

Cuando la cánula llegue a la bifurcación donde la tráquea se divide en los bronquios izquierdo y derecho, haga un ligero movimiento de torsión hacia el lado izquierdo del animal para asegurarse de que la cánula se inserte en el bronquio izquierdo.

Un error común es no colocar el inóculo lo suficientemente profundo en el pulmón, lo que puede bloquear las vías respiratorias e inhibir la respiración. Cuando una cánula se gira al ángulo adecuado, debe deslizarse fácilmente hacia el bronquio izquierdo y avanzar suavemente hasta la profundidad adecuada.

Avance la cánula de metal hasta que el final esté a la mitad de 3/4 del pulmón izquierdo, utilizando la marca de guía colocada anteriormente para confirmar que se ha alcanzado la profundidad adecuada. Con la cánula de metal en su lugar, avance el tubo de polietileno varios milímetros usando la marca de guía colocada anteriormente en el tubo para asegurarse de que avance solo lo suficiente como para salir del extremo de la cánula de metal y no perforar el pulmón.

Con ambas cánulas en su lugar, use la jeringa adjunta para instilar 100 microlitros de suspensión de agar profundamente en el lóbulo grande del pulmón izquierdo. Retire varios milímetros del tubo y retire suavemente el dispositivo de intubación intacto. Vuelva a colocarlo en el tubo de almacenamiento de vidrio y mueva al animal a una jaula nueva para que se recupere.