Canulación del conducto linfático mesentérico en un modelo de rata para recolectar líquido linfático

Comience con una rata intervenida quirúrgicamente con su abdomen expuesto.

Localizar el conducto linfático mesentérico superior, situado perpendicular al riñón derecho y colocado delante y paralelo a la arteria mesentérica.

Pase fórceps rectos a través del lecho de grasa perirrenal.

Tire de una cánula linfática a través del lecho de grasa perirrenal, colocando un extremo adyacente al conducto linfático y permitiendo que el otro extremo sobresalga fuera del cuerpo del animal.

A continuación, cree una pequeña incisión en el conducto linfático.

Llene la cánula con una solución anticoagulante e insértela en el conducto linfático.

Dentro del conducto, el líquido linfático contiene varias biomoléculas, incluidos factores de coagulación que desencadenan una cascada de eventos que conducen a la formación de coágulos.

Sin embargo, el anticoagulante se une a los factores de coagulación, inhibiendo su actividad.

Esto permite que el líquido linfático no coagulado fluya libremente a través de la cánula.

Aplique un adhesivo veterinario sobre el orificio de entrada para asegurar la cánula en su lugar.

El día antes de la cirugía, corte las cánulas a las longitudes adecuadas y use una cuchilla quirúrgica estéril para hacer un bisel en la punta de cada pieza de tubo. A continuación, para preparar la cánula intraduodenal, vuelva a enrollar la cánula sobre sí misma y luego caliente la cánula para crear un punto de anclaje en el tubo.

El día de la cirugía, afeite el pelaje del lado derecho del abdomen y el cuello y las regiones de la clavícula izquierda de una rata adulta anestesiada, y luego, limpie las regiones quirúrgicas asépticamente con tres soluciones sucesivas de povidona yodada y exfoliantes de etanol al 70%.

Para canular el conducto linfático mesentérico, coloque al animal con el lado derecho hacia arriba y use una hoja de bisturí estéril para abrir la capa superior de la pared muscular abdominal con una incisión recta de cuatro centímetros que se extiende desde el proceso xifoides hasta el flanco derecho, aproximadamente dos centímetros por debajo del margen costal.

Retraiga el intestino delgado debajo de la pared abdominal izquierda y use dos o tres piezas de gasa estéril saturada con solución salina normal para mantenerla en su lugar. Luego, coloque un puente sobre la rata sobre una jeringa de plástico de 10 mililitros colocada horizontalmente debajo de la espalda del animal al nivel del riñón derecho para ayudar en la visualización del conducto linfático mesentérico.

Localice el conducto linfático mesentérico superior, que tiene aproximadamente de 0,5 a 1 milímetro de diámetro, perpendicular al riñón derecho, e inmediatamente rostral y paralelo a la arteria mesentérica pulsante de color rojo oscuro. Tenga en cuenta que en las ratas sin ayuno, como se muestra aquí, el conducto linfático mesentérico superior es blanco, opaco y más fácil de visualizar que en las ratas en ayunas.

A continuación, pase un par de fórceps rectos a través del lecho de grasa perirrenal en el margen inferior del riñón derecho paralelo al conducto linfático mesentérico superior, y a través de las capas de tejido conectivo, inmediatamente debajo de la vena cava. Luego, usando la punta de las pinzas, tire de la cánula linfática a través del lecho de grasa perirrenal con un extremo inmediatamente adyacente al conducto linfático mesentérico y el otro exteriorizado del animal al nivel del riñón derecho.

Luego, usando un microscopio quirúrgico y pinzas de joyero, aísle el conducto linfático mesentérico a través de las capas suprayacentes de tejido conectivo y graso mediante disección roma, comenzando en el extremo inferior y teniendo cuidado de no dañar el conducto linfático. Cuando se haya aislado el conducto, use la punta de las pinzas de punta fina para hacer un pequeño orificio en el conducto linfático. Después de asegurarse de que la cánula linfática esté completamente llena de solución anticoagulante y sin espacios de aire, use un pequeño par de fórceps para insertar la cánula linfática aproximadamente de dos a cuatro milímetros dentro del conducto linfático mesentérico a través de la punción.

Si la canulación es exitosa, se observará un flujo gradual de linfa intestinal desde el extremo de recolección libre de la cánula. Cuando esto ocurra, coloque una pequeña gota de pegamento de cianoacrilato sobre el orificio de entrada en el conducto linfático para asegurar la cánula, teniendo cuidado de no ocluir el vaso con exceso de pegamento.