Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:53 min. • July 8th, 2025
Para comenzar, tome un tubo que contenga células cancerosas en medios sin suero para minimizar la interferencia de esterasa sérica durante el ensayo. Incubar con colorante AM de calceína no fluorescente.
Las esterasas intracelulares activas hidrolizan la calceína AM en un colorante de calceína fluorescente impermeable a la membrana retenido en el citoplasma.
Células cancerosas teñidas con calceína en placa y células NK efectoras en los pocillos de prueba, mientras que los pocillos de control solo contienen células cancerosas teñidas con calceína sin células NK.
Los receptores activadores de la superficie celular de las células NK se unen a los ligandos activadores en las células cancerosas, formando una sinapsis inmune. Esta unión activa la señalización de las células NK, polarizando los gránulos citotóxicos que contienen perforinas y granzimas hacia la sinapsis para su liberación.
Las perforinas forman poros de la membrana de las células cancerosas, facilitando la entrada celular de granzimas e iniciando la apoptosis. La integridad comprometida de la membrana provoca fugas de calceína fluorescente, lo que reduce la fluorescencia de las células cancerosas.
Capture imágenes de fluor
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