Un ensayo para la citotoxicidad mediada por proteínas extracelulares bacterianas en PMN
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:14 min. • July 8th, 2025
Tome un cultivo de Staphylococcus aureus, una bacteria patógena que secreta leucocidina, una toxina formadora de poros, que comprende componentes monoméricos S y F.
Granular las células y diluir en serie el sobrenadante. Transfiera el sobrenadante que contiene leucocidina a una microplaca que tenga leucocitos polimorfonucleares, o PMN, e incube.
El componente S se une a receptores transmembrana específicos en PMN, seguido de heterooligomerización con el componente F para insertarlo en la membrana celular, lo que resulta en la formación de poros.
El poro provoca una disminución de los iones de potasio intracelulares, activando la proteína 3 o NLRP3 que contiene el dominio de pirina de la familia NLR.
NLRP3 se une a una proteína similar a una mancha asociada a la apoptosis que contiene un dominio de reclutamiento de caspasa, o ASC, que recluta pro-caspasa-1, formando un inflamasoma.
La autoproteólisis convierte la pro-caspasa-1 en caspasa-1 activa, desencadenando la muerte celular.
Cosecha las celdas a intervalos definidos. Agregue yoduro de propidio o PI, que ingresa a las células muertas a través de membranas dañadas para unirse al ADN, emitiendo fluorescencia.
Usando citometría de
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