Evaluación de la virulencia de Leishmania en macrófagos cultivados
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:46 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga macrófagos derivados de la médula ósea en cubreobjetos.
Trate los macrófagos con promastigotes de Leishmania, la etapa infecciosa del parásito.
Durante la incubación, los parásitos interactúan con los macrófagos, facilitando el ensamblaje de F-actina alrededor del sitio de interacción.
Los macrófagos envuelven a los parásitos en fagosomas rodeados de F-actina, formando vacuolas parasitóforas o PV, un nicho replicativo.
Dentro de los PV, los parásitos liberan factores de supervivencia, aumentando la acumulación de F-actina alrededor de las vacuolas e inhibiendo su fusión con los lisosomas.
Además, los parásitos regulan al alza la producción de hepcidina, una hormona peptídica de macrófagos, que inhibe la liberación de hierro y eleva los niveles de hierro intracelular.
La entrada de hierro en las vacuolas promueve la diferenciación de promastigotes en amastigotes patógenos y facilita su multiplicación, mejorando la virulencia.
Después de la incubación, lavar para eliminar los parásitos libres, luego, fijar y permeabilizar los macrófagos infectados.
Introducir un colorante fluorescente de ácido nucleico para teñir los núcleos d
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