Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:37 min. • July 8th, 2025
Durante la infección por Porphyromonas gingivalis, las fimbrias de las bacterias anaeróbicas se unen a receptores específicos en las células huésped.
Esta unión inicia cascadas de señalización intracelular, lo que resulta en un reordenamiento de actina e internalización bacteriana dentro de los fagosomas.
Para evaluar la supervivencia de Porphyromonas gingivalis internalizado dentro de las células endoteliales in vitro, tome una placa de pocillos múltiples que contenga células endoteliales adheridas a cubreobjetos.
Agregue la suspensión de Porphyromonas gingivalis. Incubar para facilitar la internalización bacteriana.
Retire los medios y lávelos con un tampón anaeróbico para eliminar las bacterias no internalizadas.
Agregue medios que contengan antibióticos, impermeables a las células endoteliales, para eliminar las bacterias adheridas a la superficie.
Incubar con un tensioactivo suave para lisar las células endoteliales, liberando las bacterias sin provocar su lisis.
Diluir el lisado recogido con medios. Prepare diluciones seriadas del lisado.
Coloque las diluciones en placas de agar sangre. Incubar en condiciones anaeróbicas para que Porphyromonas gingivalis crezca y forme colonias visibles.
Cuente las colonias para evaluar la capacidad de Porphyromonas gingivalis para invadir y sobrevivir dentro de las células endoteliales.
Después de la infección de las células HUVEC, lave las células tres veces con PBS anaeróbico. A continuación, agregue 2 mililitros de medio VEGF suplementado con concentraciones preoptimizadas de antibióticos a las células HUVEC. Incuba las células durante una hora. Aspire el medio y agregue 2 mililitros de solución de saponina al 1% en BHI a cada pocillo. Incubar durante 15 minutos.
A continuación, raspe las células lisadas y recoja el lisado en un tubo de centrífuga. Diluir el lisado 1 a 1 con medio BHI y luego preparar diluciones seriadas a partir de 1 a 100. Placa 200 microlitros de las concentraciones adecuadas en placas de agar sangre. Deje que las bacterias crezcan durante siete días en una cámara anaeróbica y luego cuente las colonias.