Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:18 min. • July 8th, 2025
Comience con las subpoblaciones de macrófagos M1 y M2 adherentes, que se distinguen por sus marcadores de superficie específicos. Estas células están infectadas con Mycobacterium tuberculosis marcada con fluorescencia.
Agregue la zona de influencia FACS a los pocillos de cultivo.
El EDTA en el tampón permite el desprendimiento celular de los pocillos de cultivo.
Transfiera la suspensión celular a tubos de microcentrífuga.
Centrifugar los tubos. Deseche el sobrenadante. Resuspenda las células en un cóctel de anticuerpos antimacrófagos conjugado con fluorocromo y un tinte de viabilidad, Zombie-UV.
El colorante de fluorescencia Zombie-UV ingresa a las células muertas a través de membranas dañadas y se une a las proteínas citoplasmáticas, lo que permite una clara diferenciación de las células viables sin teñir.
Además, los anticuerpos antimacrófagos conjugados con fluorescencia se unen a los antígenos diana en los macrófagos, lo que permite la detección diferencial de subpoblaciones.
Lave las células para eliminar los anticuerpos no unidos. Centrífuga. Retire el sobrenadante.
Vuelva a suspender las células en un tampón fijador para reticular proteínas, preservando la morfología celular
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