Tinción de células bacterianas y preparación para estudios inmunológicos

Comience con un tubo que contenga un cultivo bacteriano en la fase exponencial, asegurando bacterias uniformes y en crecimiento activo para obtener resultados consistentes.

Centrifugar para recolectar las células; aspirar el sobrenadante que contiene desechos y volver a suspender las células.

Introduce un tinte fluorescente rojo permeable a las células. Las moléculas de tinte penetran en la membrana celular bacteriana y llegan al nucleoide, uniéndose con el ADN e impartiendo fluorescencia roja a las bacterias.

Centrifugar para granular las bacterias teñidas y aspirar el sobrenadante que contiene colorante no unido.

Vuelva a suspender las bacterias en un medio de crecimiento para mantener la viabilidad celular.

Con un fotómetro, mida la absorbancia de la suspensión bacteriana diluida a 600 nanómetros.

Compare el valor de absorbancia con una curva estándar para determinar la concentración bacteriana.

Transfiera el volumen deseado de la suspensión bacteriana teñida a un tubo nuevo que contenga un medio de crecimiento. Esto es para lograr la concentración bacteriana deseada para la infección de la célula huésped que representa la multiplicidad de la infección, o MOI.

Las bacterias teñi