Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:40 min. • July 8th, 2025
Tome células leucémicas en medios de crecimiento sin factores estimulantes como citocinas e incube.
La ausencia de factores estimulantes permite que las proteínas fosforiladas intracelulares sufran desfosforilación y vuelvan a sus estados nativos.
Centrifugar y retirar el medio. Resuspender las células en el sobrenadante del estroma que contiene la citocina, la linfopoyetina estromal tímica o TSLP.
TSLP se une a su receptor en la célula leucémica, desencadenando la dimerización del receptor.
Esto acerca las dos quinasas asociadas a Janus, o JAK, lo que facilita la transfosforilación mutua.
Los JAK activados fosforilan las colas citoplasmáticas del receptor, creando sitios de acoplamiento para el transductor de señales y activador de la transcripción, los monómeros STAT.
Una vez fosforilados, los STAT se dimerizan y se separan del receptor para regular los procesos celulares posteriores.
Fijar las células para mantener los estados de fosforilación de las proteínas intracelulares.
Tratar las células con una solución de permeabilización para aumentar la permeabilidad de la membrana celular.
Agregue anticuerpos marcados con fluorescencia para marcar las proteínas fosforiladas.
La medic
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