Visualización de bacterias en secciones de biopsia vesical mediante hibridación fluorescente in situ

Comience con un portaobjetos de vidrio que contenga una sección de tejido de biopsia de vejiga urinaria infectada desparafina y rehidratada que contenga bacterias uropatógenas.

Introducir sondas universales marcadas con fluorescencia, un oligonucleótido monocatenario complementario específico para la región conservada del ARN ribosómico bacteriano 16s o ARNr 16s.

Incube el portaobjetos en la oscuridad a una temperatura elevada para una hibridación óptima.

Durante la incubación, las sondas se hibridan exclusivamente con la región conservada en el ARNr bacteriano 16s, impartiendo fluorescencia verde a las bacterias.

Después de la hibridación, lavar con un tampón precalentado para eliminar las sondas sueltas.

Tiña la sección de tejido con colorante Hoechst y marcadores de proteínas celulares marcados con fluoróforo.

Las moléculas de Hoechst se unen al ADN, tiñendo los núcleos de azul, mientras que los marcadores marcados con fluoróforo interactúan con componentes celulares específicos como filamentos de mucina y actina, impartiendo fluorescencia roja en la sección de biopsia.

Lave el portaobjetos y agregue medios de montaje a la sección de tejido.

Bajo un microscopio confocal, la fluo