Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:54 min. • July 8th, 2025
Tome una suspensión de células Jurkat: células leucémicas de linfocitos T.
Mezclar una alícuota con un colorante de viabilidad celular y asegurar un número adecuado de células vivas.
Coloque las células en una placa de cultivo y aplique radiación ultravioleta C o UVC durante el tiempo requerido.
La UVC penetra en las células y es absorbida por el ADN, formando fotoproductos de pirimidina.
Después de la irradiación, incubar las células. El daño extenso del ADN mediado por UVC inicia la vía de apoptosis intrínseca, activando proteínas proapoptóticas en la membrana mitocondrial externa.
Las proteínas activadas se oligomerizan, formando poros de membrana y liberando citocromo C del espacio intermembrana al citoplasma.
Complejos de citocromo C con el factor activador de proteasa apoptótica-1, formando un complejo de apoptosomas. El apoptosoma activa las caspasas, causando apoptosis.
Introduzca anexina V marcada con fluoróforo para marcar la fosfatidilserina en la membrana, un marcador celular apoptótico, y agregue yoduro de propidio que ingresa a través de la membrana dañada para marcar el ADN.
Mediante citometría de flujo, determine las células apoptóticas tempranas marcadas con anexin
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