Imágenes de superresolución de la formación de sinapsis inmunológica de células NK en una bicapa lipídica soportada

Prepare un portaobjetos de cámara con una bicapa lipídica soportada, o SLB, compuesta de fosfolípidos y fosfolípidos biotinilados.

Agregue proteínas bloqueadoras para evitar interacciones no específicas.

Introducir estreptavidina, que se une a los fosfolípidos biotinilados.

Agregue anticuerpos anti-CD16 marcados con fluorescencia biotinilados, que se unen a la estreptavidina inmovilizada.

Pipetear D-biotina para evitar la unión no específica de la estreptavidina a las células.

Introduzca células asesinas naturales o NK. Los receptores CD16 de estas células se unen específicamente a los anticuerpos anti-CD16 unidos a SLB, formando una sinapsis inmunológica.

Esta unión desencadena el reordenamiento de actina y la polarización de los microtúbulos, formando finalmente microgrupos en el centro de la sinapsis que contienen anticuerpos anti-CD16 unidos a SLB y receptores CD16.

Los gránulos líticos que contienen perforina se polarizan y penetran a través de filamentos de actina en la sinapsis.

Arregla las celdas. Permeabilizar las membranas y SLB.

Agregue faloidina y anticuerpos anti-perforina marcados con fluorescencia, que se unen a los filamentos de actina y perforina, respectivamente.