Ensayo de citotoxicidad mediada por células asesinas naturales Preparación de muestras para análisis de citometría de flujo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:40 min. • July 8th, 2025
Comience con un gránulo de células que contenga células asesinas naturales o NK y células diana teñidas con fluorescencia.
Vuelva a suspender el pellet en un medio adecuado e incube.
La célula NK interactúa a través de proteínas de adhesión superficial, formando una sinapsis inmunológica con la célula diana.
Esto inicia la señalización de las células NK, liberando gránulos citotóxicos, que contienen perforina y granzimas en la sinapsis.
La perforina, una proteína formadora de poros, crea canales en la membrana de la célula diana, lo que permite que las granzimas entren en el citoplasma.
La granzima, una serina proteasa, interactúa con las proteínas intracelulares, activando la vía apoptótica en la célula diana.
Ahora, agregue el tinte fluorescente de yoduro de propidio.
El tinte ingresa a las células muertas a través de sus membranas dañadas y se une al ADN intercalándose entre sus pares de bases.
En consecuencia, las células muertas expresan doble fluorocromo mientras que las células vivas expresan un solo fluorocromo.
La muestra está lista para la citometría de flujo para evaluar la citotoxicidad inducida por las células NK mediante la cuantificación del número de células diana m
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