Evaluación de la citotoxicidad y la integridad de la membrana en cortes pulmonares mediante el ensayo de lactato deshidrogenasa
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:58 min. • July 8th, 2025
Comience con cortes de pulmón humanos cortados con precisión, PCLS, tratados con agentes citotóxicos como moléculas de surfactante en una placa de múltiples pocillos.
El surfactante se inserta en la bicapa lipídica de la célula, lo que hace que las colas hidrofóbicas del surfactante interactúen con el núcleo hidrofóbico de la bicapa lipídica.
En consecuencia, se altera la disposición ordenada de las moléculas lipídicas, lo que lleva a la formación de una micela.
Esto compromete la integridad de la membrana, causando la fuga de contenido intracelular, incluida la lactato deshidrogenasa o LDH, un indicador común de daño en la membrana celular.
Recoge el sobrenadante que contiene la LDH liberada.
Agregue el cóctel de reacción del ensayo LDH que contiene sustrato de lactato, NAD+, diaforasa y sal de tetrazolio, e incube.
La LDH oxida el lactato a piruvato, con reducción simultánea de la coenzima NAD+ a NADH.
La diaforasa utiliza el NADH para reducir la sal de tetrazolio en formazán, un producto coloreado.
La citotoxicidad inducida por surfactante se puede medir a partir de la actividad de LDH indicada por la producción de formazán.
Después de incubar los PCLS con o sin agentes de prueb
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