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$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Tome una solución paramagnética de gadolinio que responda a los campos magnéticos externos.
Introduzca muestras de sangre Rhesus o factor Rh positivo y sin marcar con factor Rh negativo marcado con fluorescencia.
Agregue perlas de polímero de baja densidad recubiertas de anticuerpos anti-RhD y perlas de alta densidad sin recubrimiento.
Los
anticuerpos anti-RhD se unen a los antígenos RhD en los glóbulos rojos Rh positivos, formando complejos de perlas-glóbulos rojos.
Ahora, cargue la muestra en un tubo capilar y séllelo. Coloque el tubo entre los imanes en el dispositivo de levitación magnética.
En el campo magnético generado por imanes orientados hacia polos similares, la solución paramagnética ejerce fuerzas magnéticas y de flotación sobre los componentes de la muestra, lo que hace que leviten a alturas proporcionales a sus densidades.
Las perlas de baja y alta densidad levitan en la parte superior e inferior del capilar, respectivamente, estableciendo referencias de altura de densidad.
Las células sanguíneas, al ser diamagnéticas, son repelidas por un fuerte campo magnético cerca de los imanes y levitan en una posición intermedia.
Los complejos de perlas-glóbulos rojos levitan entre las perlas de baja densidad y los glóbulos rojos, con células fluorescentes en esta capa que confirman la presencia de glóbulos rojos Rh positivos.
Para comenzar, use el dispositivo de lanceta de un solo clic para pinchar el dedo del donante de sangre con factor Rhesus positivo y recolecte 10 microlitros de sangre en 1 mililitro de DPBS. Agregue 1 microlitro de tinte fluorescente en suspensión de 1 mililitro de células positivas para el factor Rhesus para teñir fluorescentemente la membrana plasmática e incubar a 37 grados Celsius durante 15 minutos. Granular las células girando a 5.600 veces g durante 15 segundos y lavar el pellet tres veces, usando 1 mililitro de DPBS. Vuelva a suspender el gránulo en 1 mililitro de HBSS con calcio y magnesio. Use el dispositivo de punción con un solo clic para pinchar el dedo del donante de sangre con factor Rhesus negativo y recolectar dos microlitros de sangre.
Para preparar el tubo experimental que contiene solo perlas, agregue 174 microlitros de HBSS con calcio y magnesio, 1 microlitro de perlas de control de IgG, 1 microlitro de perlas pesadas, con una densidad de 1,2 gramos por mililitro, y 24 microlitros de gadolinio 500 milimolar.
Para preparar el tubo de control experimental que contiene IgG, agregue 172 microlitros de HBSS con calcio y magnesio, 1 microlitro de perlas de control de IgG, 1 microlitro de perlas pesadas, 1 microlitro de sangre con factor Rhesus negativo, 1 microlitro de suspensión de sangre con factor Rhesus positivo teñido y 24 microlitros de gadolinio 500 milimolar.
Para preparar el tubo experimental de muestra, agregue 172 microlitros de HBSS con calcio y magnesio, 1 microlitro de perlas recubiertas de anti-RhD, 1 microlitro de perlas pesadas, 1 microlitro de sangre con factor rhesus negativo, 1 microlitro de suspensión de sangre con factor rhesus positivo teñido y 24 microlitros de gadolinio 500 milimolar. Configure el dispositivo de levitación magnética y cargue 50 microlitros de la muestra en un tubo capilar hasta que se llene el tubo.
Selle los extremos del tubo capilar con un sellador capilar, asegurándose de que no haya burbujas. Coloque el tubo capilar en el soporte capilar entre los imanes superior e inferior. Ajuste el escenario y enfoque para una visualización óptima. Espere aproximadamente de 5 a 20 minutos para que las células y las perlas se asienten en su posición de equilibrio magnético.