Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:40 min. • July 8th, 2025
Comience agregando un agente farmacológico inmunomodulador a las células dendríticas inmaduras o DC.
Las CD expresan un complejo principal de histocompatibilidad, o molécula MHC de clase II y moléculas coestimuladoras, cruciales para promover la proliferación de células T durante las respuestas inmunitarias.
El agente inmunomodulador se involucra con la DC y desencadena la regulación a la baja de la expresión de las moléculas coestimuladoras y de clase II del MHC, convirtiendo así la DC en una célula dendrítica tolerogénica o TolDC.
Cocultivo de TolDCs con células T CD4+ vírgenes.
Agregue un péptido antigénico al cocultivo.
Los TolDC internalizan el péptido, procesando y cargando posteriormente el antígeno resultante en la molécula MHC.
La molécula MHC unida al antígeno se transloca a la membrana celular.
Lascélulas T CD4+ vírgenes interactúan directamente con el complejo antígeno-MHC en TolDC.
La interacción con la molécula coestimuladora en la DC madura permite la activación completa de la célula T ingenua.
Sin coestimulación, la célula T CD4+ ingenua permanece inactiva y no puede iniciar una respuesta inmune contra el antígeno presentado.
Vuelva a suspender las células a una concentración de 2 x 105 células dendríticas por mililitro y trátelas con la concentración experimental adecuada del triterpenoide de interés durante 1 hora a 37 grados Celsius.
Durante el último tercio de la incubación, vuelva a suspender las células T a una concentración de 1 x 10 7 células por mililitro y 1 CFSE micromolar durante 15 minutos a 37 grados centígrados. Luego, lave las células con PBS y reajuste el volumen a una concentración final de 2 x 10 6 células T por mililitro.
Cocultive 100 microlitros de las células dendríticas tratadas con 100 microlitros de células T CD4 CD4 positivas marcadas con CFSE en cada pocillo de una placa de 96 pocillos, y agregue 100 nanogramos por mililitro del péptido OVA 322-329 a las células, midiendo la intensidad CFSE de las células T por citometría de flujo después de 2 a 3 días de incubación.