Una técnica in vitro para visualizar la exocitosis de los gránulos secretores en los mastocitos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:34 min. • July 8th, 2025
Tome un cubreobjetos con cámara que contenga mastocitos, células inmunitarias con gránulos secretores, o SG, que contienen mediadores inflamatorios.
Agregue anticuerpos IgE junto con un reportero fluorescente sensible al pH e incube.
Los anticuerpos se unen a los receptores Fc en los mastocitos. Los reporteros se internalizan a través de la pinocitosis y los endosomas resultantes se fusionan con los SG.
Retire el medio. Agregue un antígeno que contenga múltiples epítopos de unión a IgE; Coloque el portaobjetos bajo un microscopio de fluorescencia y aplique la longitud de onda de excitación requerida.
El pH ácido de los SG apaga la fluorescencia indicadora.
El antígeno se une a los complejos receptores de IgE en la superficie celular, entrecruzándolos.
La agregación de receptores mediada por antígenos hace que los SG migren hacia la membrana plasmática.
Las proteínas SNARE en el plasma y la membrana SG median la fusión de la membrana y la descarga de la carga SG, lo que se denomina exocitosis.
El pH más alto del medio provoca la alcalinización de SG, induciendo a los reporteros a recuperar la fluorescencia.
Los SG entrantes se fusionan con los fusionados con membrana. La alcalinizac
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