Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:54 min. • July 8th, 2025
Tome esplenocitos agotados en glóbulos rojos en un tampón que contenga un tinte fluorescente sensible al calcio permeable a las células, Indo-1 AM.
Las esterasas intracelulares escinden Indo-1 AM en Indo-1 impermeable a la membrana, que se une a los iones de calcio, cambiando la señal de fluorescencia de Indo-1 de azul a violeta.
Introducir anticuerpos específicos de antígeno conjugados con fluoróforos que se unan específicamente a los respectivos antígenos en las células.
Usando citometría de flujo, identifique las células B marcadas con fluoróforo y mida su relación de fluorescencia violeta-azul Indo-1.
Ahora, trate las células con liposomas antigénicos que comprenden fragmentos de IgM Fab conjugados con bicapas liposomales.
Los receptores de células B se unen a los antígenos acoplados a liposomas, activando las tirosina quinasas citoplasmáticas asociadas y desencadenando la activación de la fosfolipasa-C gamma-2.
La fosfolipasa-C activada escinde el fosfolípido de membrana, fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato, generando segundos mensajeros, incluido el inositol 1,4,5-trifosfato o IP3.
IP3 se une a los canales de calcio activados por IP3 en el retículo endoplásmico, liberando iones
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