Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:24 min. • July 8th, 2025
Tomemos una larva de pez cebra inyectada con esporas de hongos en el ventrículo del rombencéfalo.
Los macrófagos se reclutan en el sitio de inyección, formando un grupo apretado alrededor de las esporas.
Las esporas sufren un engullimiento fagocítico por macrófagos.
Estas esporas tienen la capacidad de resistir la degradación dentro del fagosoma, lo que les permite germinar en hifas e inducir la muerte celular necrótica del macrófago.
Las hifas poseen patrones moleculares asociados a patógenos expuestos, o PAMP, en su superficie.
Los neutrófilos reclutados en el sitio de la infección, reconocen y se unen a los PAMP. El contacto con los neutrófilos desencadena un complejo fenotipo hiperramificado en las hifas, lo que dificulta su absorción por los neutrófilos y facilita la evasión inmune.
Homogeneizar la larva, liberando las esporas de hongos e hifas viables. Centrifugar para eliminar los restos celulares y colocar el sobrenadante en un medio de crecimiento.
Tras la incubación, cuente las unidades formadoras de colonias de hongos o UFC.
Los recuentos de UFC representan el número de esporas de hongos viables que evadieron las defensas inmunitarias del huésped.
Inmediatamente después de la inyección, transfiera ocho de las larvas a tubos individuales de 1,7 mililitros y eutanasiarlos. Prepare 1 mililitro de PBS con ampicilina y kanamicina. Retire la mayor cantidad de líquido posible de los tubos con las larvas. Luego, agregue 90 microlitros de PBS con antibióticos.
Homogeneizar las larvas en un lisador de tejidos a 1.800 oscilaciones por minuto durante 6 minutos. Luego, gírelos a 17,000 veces g durante 30 segundos. Pipetee la suspensión homogeneizada de cada tubo hasta el centro de una placa GMM etiquetada y extiéndala con un esparcidor desechable en forma de L, teniendo cuidado de evitar que se extienda contra el borde. Incube las placas boca abajo a 37 grados centígrados durante 2 a 3 días. Luego, cuente el número de colonias formadas.