Un método de localización de inmunofluorescencia in vivo para estudiar la biodistribución de anticuerpos

Tomemos un modelo murino de cáncer de mama. Los tumores de la glándula mamaria comprenden células cancerosas, fibroblastos asociados al cáncer, adipocitos, células inmunitarias y vasculatura tumoral.

Inyecte por vía intravenosa anticuerpos específicos del tumor conjugados con fluoróforos.

Al llegar a la vasculatura tumoral, los anticuerpos se unen a las proteínas transmembrana específicas del tumor en el endotelio del vaso y las células cancerosas cercanas.

Aísle quirúrgicamente la glándula mamaria y sumérjala en un medio de congelación.

Obtenga criosecciones en un portaobjetos y enjuague con un tampón para eliminar el medio de congelación.

Fije las secciones para preservar la arquitectura del tejido. Aplique un detergente para mejorar la inmunotinción y una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.

Introducir un anticuerpo primario específico para moléculas de adhesión en el endotelio de los vasos sanguíneos y un anticuerpo secundario conjugado con fluoróforo que se une al anticuerpo primario, marcando la vasculatura.

Agregue un medio de montaje en la corredera y coloque un cubreobjetos.

Bajo un microscopio confocal, evalúe la biodistribución de antic