Medición cuantitativa por citometría de flujo de la fagocitosis de esporas fúngicas por fagocitos humanos

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga una suspensión de leucocitos humanos. Agregue esporas de hongos patógenos marcados con FITC.

Durante la incubación, las esporas se hinchan y rompen su capa rígida de proteína hidrofóbica, exponiendo los polisacáridos de la pared celular reconocidos por receptores de reconocimiento de patrones específicos en las células fagocíticas.

Esta unión desencadena vías de señalización intracelular, lo que lleva a un reordenamiento de actina y a la internalización de esporas dentro de los fagosomas.

Dependiendo del estado de activación de los fagocitos, algunas esporas permanecen adheridas a las células sin internalización.

Después de la incubación, recolecte las células y transfiéralas a un tubo nuevo.

centrífuga. Vuelva a suspender las células en un tampón y transfiéralas a una placa de fondo en V de varios pocillos.

Introducir anticuerpos anti-FITC marcados con fluoróforo que se unen a las moléculas FITC expuestas en las esporas adheridas, contrarrestándolas.

centrífuga. Vuelva a suspender las células en un tampón y transfiéralas a tubos de citómetro de flujo.

Realice citometría de flujo para diferenciar entre esporas internalizadas y adher