Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:34 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga células de osteosarcoma adherentes en los cubreobjetos.
Estas células de cáncer de hueso se tratan previamente con un químico que induce estrés, lo que resulta en la formación de gránulos de estrés.
Los gránulos de estrés son orgánulos sin membrana citoplasmática que comprenden ARNm no traducibles, pequeñas subunidades ribosómicas, proteínas de unión al ARN o RBP, factores relacionados con la traducción y proteínas de señalización.
Deseche el medio y lave las celdas con tampón. Fije las células para preservar la morfología celular.
Permeabiliza las células para acceder a dianas intracelulares. Agregue proteínas bloqueadoras para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Introducir anticuerpos primarios que se unan a RBP específicos y factores relacionados con la traducción dentro de los gránulos de estrés.
Incubar con diferentes anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo y colorante Hoechst.
Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios unidos a las proteínas asociadas a los gránulos de estrés, mientras que las moléculas de Hoechst tiñen el ADN.
Monte los cubreobjetos que contienen celdas utilizando medio
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