Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:59 min. • July 8th, 2025
Comience con tubos que contengan sangre entera humana, incluidos glóbulos rojos o glóbulos rojos, y glóbulos blancos, o glóbulos blancos, como monocitos y granulocitos, y otros glóbulos sanguíneos.
Introduzca dihidroetidio (un indicador de superóxido y bacterias no marcadas) en un tubo. Trate el otro tubo con bacterias verdes marcadas con fluoróforo.
Los granulocitos y monocitos interactúan con las moléculas asociadas a patógenos de las bacterias, envolviéndolas dentro de los fagosomas.
Esto activa la enzima de membrana fagosomal, NADPH oxidasa, reduciendo el oxígeno molecular a un anión superóxido.
El anión superóxido produce además peróxido de hidrógeno, una especie reactiva de oxígeno, o ROS, que resulta en un estallido oxidativo.
Dentro del fagosoma, las ROS oxidan el dihidroetidio para formar 2-hidroxietidio, que tiñe el ADN bacteriano, impartiendo una fluorescencia roja.
Introducir un extintor, para apagar la fluorescencia extracelular.
Agregue una solución de lisis, eliminando posibles interferencias de glóbulos rojos, y arregle los glóbulos blancos.
En la citometría de flujo, las células con fluorescencia verde confirman la actividad fagocítica de los granulocitos y monocit
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