Cuantificación de los niveles de mediadores inmunitarios en el líquido de revestimiento de la mucosa humana
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:55 min. • July 8th, 2025
Descongele los papeles de filtro que contienen el líquido absorbido del revestimiento de la mucosa nasal en hielo para evitar la degradación de la muestra.
El líquido comprende mediadores inmunológicos, incluidas quimiocinas y citocinas.
Sumerja los papeles de filtro en un tampón. Transfiera el contenido a filtros de tubo. Centrifugar para eluir el líquido de revestimiento de la mucosa del papel de filtro.
Agregue el extracto nasal filtrado a la placa de ensayo con un patrón de una variedad de anticuerpos de captura específicos del mediador.
Los mediadores inmunológicos se unen a sus anticuerpos correspondientes.
Introducir anticuerpos de detección marcados con un complejo de rutenio, que se unen a sus respectivos mediadores.
Agregue tampón basado en tris que contenga tripropilamina o TPA.
Cuando se aplica un potencial a través de los electrodos, el complejo de rutenio y el TPA se oxidan.
El radical TPA resultante excita el complejo de rutenio.
Al volver a su estado fundamental, el complejo de rutenio emite fotones.
La intensidad de la luz medida es proporcional a la concentración específica del mediador inmunitario en el líquido del revestimiento de la mucosa.
Para la cuantificaci
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