Un ensayo in vitro para estudiar la citotoxicidad de las células T CD8⁺ preactivadas contra las células cancerosas

Tomemos dos poblaciones de células T CD8⁺: células T CD8⁺ efectoras preactivadas a través de la participación mediada por anticuerpos de las células T y los receptores coestimuladores y células T CD8⁺ suprimidas inhibidas por células supresoras derivadas de mieloides.

Agregue estas células T a pocillos recubiertos de membrana basal con células cancerosas que expresan una proteína fluorescente restringida nuclearmente.

Pipetear un sustrato fluorogénico de caspasa-3, un colorante fluorogénico que se une al ADN conjugado con un péptido que contiene el sitio de reconocimiento de la caspasa-3.

incubar. Los receptores de células T efectoras se unen al complejo MHC-péptido de clase I en las células cancerosas, lo que desencadena la liberación de gránulos citotóxicos que contienen perforinas y granzimas.

Las perforinas crean poros en la membrana de las células cancerosas, lo que permite la entrada de granzima y la activación de caspasas, iniciando la apoptosis.

Las caspasas activadas también escinden el sustrato de caspasas fluorogénicas, liberando el tinte que se une al ADN y emite fluorescencia.

Bajo un microscopio de fluorescencia, las células cancerosas cocultivadas con células T efect