Un ensayo para detectar la producción de especies reactivas de oxígeno en los tejidos de arroz tras la inmunitaria
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:42 min. • July 8th, 2025
Tome una microplaca que contenga segmentos de vaina uniformes cortados de plántulas de arroz y discos de hojas obtenidos de hojas de plantas de arroz.
Agregue agua estéril e incube durante la noche para permitir la recuperación del estrés de la herida.
Agregue un péptido inmunogénico derivado de flagelos bacterianos que actúe como un patrón molecular asociado a patógenos o PAMP.
Las células vegetales en los bordes cortados se unen a los PAMP a través de receptores de reconocimiento de patrones.
La unión desencadena la señalización aguas abajo, activando una enzima localizada en la membrana plasmática denominada homóloga de oxidasa respiratoria o RBOH.
El RBOH activado produce especies reactivas de oxígeno o ROS en el apoplasto, el espacio intercelular. El ROS producido se convierte en peróxido de hidrógeno.
Agregue una enzima peroxidasa y un sustrato quimioluminiscente.
La peroxidasa utiliza peróxido de hidrógeno para convertir el sustrato en un intermedio de estado excitado, que libera energía en forma de luz y vuelve al estado fundamental.
Mida la luminiscencia en ambos tipos de tejido para detectar un aumento brusco inmediatamente después del tratamiento con PAMP, lo que indica
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