Medición de la aloreactividad en una población mixta de células T

Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga células dendríticas de ratón, o CD portadoras de aloantígenos o variantes genéticas de autoantígenos.

Introducir células T de ratón, incluidas las células T aloreactivas que no reaccionan a los autoantígenos, mientras reconoce antígenos extraños.

Las células T aloreactivas reconocen estos aloantígenos e interactúan con las DC, desencadenando un reordenamiento del citoesqueleto, incluida la reorganización de la F-actina.

Esto promueve que los receptores de las células T se involucren con moléculas coestimuladoras en las DC, formando una conexión celular: una sinapsis inmunológica.

Fije las células, transfiéralas a un tubo e introduzca un cóctel de anticuerpos marcados con fluorocromo específicos para los receptores de células T y DC, impartiendo una fluorescencia distinta.

Elimine los anticuerpos no unidos y vuelva a suspender las células en un tampón que contenga un agente permeabilizante que permeabiliza las células y marcadores de proteínas marcados con fluoróforos verdes que se unen a la F-actina.

Centrifugar y volver a suspender las células en un tampón que contenga colorante nuclear, tiñendo los núcleos de rojo.

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