Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:54 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga fibroblastos de ratón en medios privados de suero. Agregue diluciones seriadas de anticuerpos específicos de TNFα.
Agregue TNFα, una citocina inflamatoria.
incubar. La privación sérica induce estrés celular, lo que hace que las células sean susceptibles a la apoptosis mediada por TNFα.
La unión del TNFα a sus receptores en las células privadas de suero desencadena cascadas de señalización intracelular, activando la cascada de caspasas e induciendo la apoptosis.
Sin embargo, la unión de anticuerpos al TNFα impide su unión al receptor, inhibiendo la activación de las caspasas.
Después de la incubación, agregue una mezcla de reactivos que contenga detergente, un sustrato de caspasa proluminiscente y una enzima luciferasa junto con iones ATP y magnesio. Mezclar e incubar.
El detergente permeabiliza las membranas, liberando caspasas de las células inducidas por TNFα.
El sustrato bioluminiscente contiene un sitio de reconocimiento de caspasas. Caspasas específicas escinden el sustrato, generando aminoluciferina.
La luciferasa oxida su sustrato, la aminoluciferina, lo que da como resultado la emisión de luz.
Mida la intensidad de la lumini
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