Un ensayo para examinar nanopartículas bioactivas para la inhibición de la señalización de receptores tipo Toll
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:53 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples con diferentes macrófagos reporteros que albergan el gen de la fosfatasa alcalina embrionaria secretada, o SEAP, o un gen de luciferasa secretado bajo promotores inducibles.
Agregue medios que contengan diferentes híbridos de péptidos y nanopartículas de oro mezclados con lipopolisacáridos o LPS a los pocillos designados.
El LPS se une a los receptores tipo toll de los macrófagos, o TLR, desencadenando la internalización en el endosoma.
La bomba de protones endosomal transporta protones en su interior. La acidificación desencadena la señalización de TLR, activando factores de transcripción.
Estos factores inducen la expresión de los genes reporteros, produciendo SEAP o luciferasa.
Alternativamente, la internalización de LPS junto con los híbridos hace que los grupos peptídicos cargados negativamente secuestren protones luminales, evitando la acidificación endosomal e inhibiendo la señalización de TLR.
Recoja el medio, centrifugue para separar el sobrenadante y agregue sustratos para SEAP y luciferasa.
SEAP convierte su sustrato en un producto coloreado, mientras que la luciferasa cataliza su sustrato para producir luminiscencia.
Una reducción en
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