JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
0 vistas • 2:49 min • July 8th, 2025
Tome una suspensión fecal de ratón que contiene bacterias lácticas, o BAL, que producen bacteriocina, un péptido antimicrobiano, e inocular en un medio de agar blando selectivo LAB precalentado.
Vierta el medio en una placa de agar, formando la primera capa.
Superponga una segunda capa de agar e incube.
La primera capa promueve selectivamente el crecimiento de BAL, lo que permite que las moléculas de bacteriocina secretadas se difundan hacia afuera de las colonias hacia el medio circundante.
La segunda capa contiene un medio libre de células que permite la difusión de bacteriocina y evita el crecimiento de colonias de BAL en la superficie.
Ahora, vierta una tercera capa de agar que contenga una cepa sensible a la bacteriocina.
Las bacterias que crecen en la tercera capa se encuentran con la bacteriocina que se difunde desde las capas inferiores.
La bacteriocina altera la membrana celular de las bacterias sensibles, perturbando la homeostasis celular y provocando la muerte celular, visible como una zona clara en la tercera capa.
Mida el diámetro de la zona para evaluar la potencia de la bacteriocina.
Para contar las células bacterianas productoras de bacteriocina en muestras fecales, transfiera las células diluidas del productor de bacteriocina a 4 mililitros de agar blando MRS precalentado. Mezcle el agar por vórtice y vierta las células en una placa de agar MRS al 1,5%. Esta capa se conoce como la primera capa.
Transfiera otros 4 mililitros de agar blando MRS al 0,8% libre de células a la primera capa para incrustar todas las células dentro del agar blando. Esta capa está destinada a evitar que las células crezcan como colonias en la superficie de las placas de agar.
En la campana estéril, seque las placas quitando la tapa durante cinco a 10 minutos antes de incubar las placas a 30 grados centígrados durante 20 a 24 horas para el crecimiento celular y la formación de colonias.
Para identificar colonias productoras de bacteriocina, mezcle 40 microlitros de un cultivo nocturno de una cepa indicadora apropiada con 4 mililitros de agar blando precalentado para cada placa. Vierta la mezcla en los platos. Esta capa se conoce como la tercera capa.
Seque e incube las placas como antes, para el crecimiento celular y la formación de colonias. Las colonias productoras de bacteriocina tienen zonas claras de inhibición alrededor de las colonias.