Un ensayo de liberación de colorante para cuantificar la actividad enzimática de las proteínas antimicrobianas

Comience con un tubo que contenga una suspensión bacteriana muerta por calor y trátelo con una solución de tinte.

Las moléculas de tinte se unen covalentemente al peptidoglicano, un componente esencial de la pared celular bacteriana, que imparte una coloración azul.

Granular las bacterias y eliminar el sobrenadante que contiene moléculas de tinte no unidas.

Vuelva a suspender las bacterias e introduzca una solución de proteína antimicrobiana en el tubo, lo que desencadena la hidrólisis enzimática del peptidoglicano bacteriano, lo que resulta en la degradación de la pared celular seguida de lisis celular.

Esto conduce a la liberación de las moléculas de colorante, impartiendo coloración azul.

Agregue etanol, un agente desnaturalizante de proteínas, que inactiva las proteínas antimicrobianas y termina la reacción enzimática.

Centrifugar el contenido para granular los fragmentos celulares y las enzimas. Transfiera el sobrenadante que contiene la molécula de tinte a una placa de pocillos múltiples.

Usando un lector de placas, mida la absorbancia a 595 nanómetros.

Compare la absorbancia de la muestra tratada con enzimas con la de la muestra no tratada con enzimas para cuantificar la act